Zombie Fixable Viability Dyes

Zombie Fixable Viability Dyes

 

Trong bất kỳ thí nghiệm nào, chất lượng dữ liệu của bạn sẽ bị ảnh hưởng lớn bởi (các) chất lượng mẫu được sử dụng. Phép đo tế bào dòng chảy cũng không ngoại lệ với quy tắc đó.

Cho dù bạn có cẩn thận đến đâu hay sử dụng bất kỳ một quy trình nào để xử lý mẫu cho phép đo tế bào dòng chảy, bạn vẫn có khả năng thu được một số tế bào chết. Một số loại tế bào nhạy cảm hơn với các quy trình xử lý dài hơn các loại khác, ví dụ như tế bào plasma thường trú ở tủy xương. Khi bạn nghĩ về phương pháp tế bào học dòng chảy thường được sử dụng để đếm và phân loại tế bào - không có gì đáng ngạc nhiên khi việc có thể phân biệt chính xác giữa tế bào chết và tế bào sống để đạt được kết quả có ý nghĩa là rất quan trọng.

 

I. Tại sao phân biệt tế bào sống/chết lại quan trọng ?

Phương pháp tế bào dòng chảy thường được sử dụng để thu được số lượng tế bào chính xác trước khi nuôi cấy tế bào mới hoặc chuẩn bị cho các xét nghiệm phân tích chức năng, trong đó số lượng tế bào ảnh hưởng lớn đến kết quả của thí nghiệm.

Số lượng tế bào chết sẽ làm sai lệch kết quả cuối cùng của bạn, ví dụ như khi đo và so sánh việc sản xuất cytokine trong nuôi cấy tế bào để đáp ứng với một số phương pháp điều trị nhất định.

Hơn nữa, vì các kháng thể có thể phản ứng với các epitope trong tế bào chết và sắp chết, nên việc đưa tế bào chết vào bất kỳ phân tích tế bào dòng chảy nào có thể ảnh hưởng lớn đến cách diễn giải thí nghiệm.

 

II. Làm thế nào để phân biệt giữa sống và chết ?

Hầu hết các thuốc nhuộm sống/chết hoạt động bằng cách liên kết với các phân tử có trên/trong tế bào chết mà thông thường các tế bào khỏe mạnh không thể tiếp cận được. Hai loại thuốc nhuộm được sử dụng rộng rãi nhất là thuốc nhuộm liên kết DNA và thuốc nhuộm amin (Hình 1).

 

Hình 1: Sơ đồ nhuộm tế bào sống và tế bào chết bằng thuốc nhuộm gắn DNA hoặc thuốc nhuộm amin

1. Thuốc nhuộm liên kết DNA

Khi tế bào chết đi, màng sinh chất của chúng trở nên dễ thấm và DNA bị lộ ra ngoài. Thuốc nhuộm liên kết DNA, ví dụ 7-AAD và propidium iodide (PI), phát sáng khi nằm xen kẽ trong DNA của các tế bào đã chết hoặc đang chết. Những thuốc nhuộm này không thể vượt qua màng tế bào nguyên vẹn, nên các tế bào sống loại trừ chúng và không phát quang hoặc chỉ phát quang rất ít khi có chúng .

 

Mặc dù thuốc nhuộm DNA dễ sử dụng và tương đối tiết kiệm chi phí nhưng chúng có một số nhược điểm đáng kể:

- Không thích hợp để nhuộm các tế bào cố định. Điều này là do tế bào trở nên dễ thấm trong quá trình cố định (thường là với dung môi) và do đó thuốc nhuộm DNA sẽ nhuộm màu tất cả các tế bào trong một mẫu nhất định. Điều này ngăn cản việc sử dụng chúng trong các giao thức phát hiện mục tiêu nội bào, trong đó cần phải cố định tế bào và thẩm thấu kháng thể.

- Nhạy cảm với sự có mặt của các dung môi biến tính hữu cơ, chẳng hạn như metanol và etanol. Các dung môi này thường được sử dụng trong các giao thức cố định, phát hiện cytokine và phát hiện kháng nguyên nội nhân, chẳng hạn như một số loại, trong đó chúng có thể làm biến tính DNA, khiến vết mất ái lực với DNA và bị cuốn trôi, dẫn đến mất tín hiệu.

- Việc lựa chọn phổ kích thích và phát xạ có phần hạn chế so với các phương án nhuộm tế bào chết khác, điều này thường cản trở việc sử dụng chúng trong các thiết lập bảng nhiều màu.

 

2. Thuốc nhuộm amin

Thuốc nhuộm amin phản ứng với các nhóm amin chính trên protein. Ở tế bào khỏe mạnh, những thuốc nhuộm này chỉ có thể liên kết với các amin trên bề mặt tế bào. Tuy nhiên, thuốc nhuộm có thể thấm các tế bào sắp chết, nơi chúng có thể liên kết với các protein trong tế bào chất. Số lượng protein nội bào cao hơn đáng kể so với số lượng protein  trên bề mặt tế bào dẫn đến tăng độ phát quang ở các tế bào sắp chết. Sự khác biệt về cường độ nhuộm màu này được sử dụng để tính toán số lượng tế bào chết có trong một mẫu.

Không giống như thuốc nhuộm liên kết DNA, thuốc nhuộm amin có thể cố định được, nghĩa là chúng có thể được sử dụng trong trường hợp cần cố định tế bào. Thuốc nhuộm được thêm vào mẫu trước khi cố định và kiểu nhuộm màu được duy trì sau quá trình cố định tiếp theo, ví dụ, bằng metanol hoặc etanol.

Một ưu điểm chính khác của thuốc nhuộm amin so với thuốc nhuộm gắn DNA là tính sẵn có của chúng trong phạm vi phổ kích thích và phát xạ rộng, mang lại sự linh hoạt cao trong việc thiết lập bảng nhiều màu.

 

III. Zombie Fixable Viability Dyes của BIOLEGEND

MEDIVISION cung cấp thuốc nhuộm Zombie của BioLegend, một họ thuốc nhuộm amin có sẵn ở nhiều phổ kích thích và phát xạ, như mô tả trong Hình 2.

 

Hình 2: Phổ phát xạ và hấp thụ của thuốc nhuộm Zombie.

 

Ngày nay, các nhà nghiên cứu đang sử dụng bảng đa màu để phát hiện nhiều mục tiêu cùng một lúc. Sự đa dạng về màu Zombie cho phép người sử dụng linh hoạt lựa chọn màu/kênh  có thể sử dụng để phát hiện mục tiêu. Bảng bên dưới sẽ giúp người sử dụng tìm ra chiến lược nhuộm màu phù hợp với nhu cầu thử nghiệm của mình!

 

Tìm  ngay thuốc thử dành cho bạn tại đây

Shares

Zombie Fixable Viability Dyes

Zombie Fixable Viability Dyes

Zombie Fixable Viability Dyes