Chi tiết bài viết
  • Osteoporosis REAL-TIME PCR Genotyping Kit
  • Giá: Contact us
  • Lượt xem: 922
  • Shares:
  • Thông tin sản phẩm
  • Bình luận

REAL TIME PCR TRONG NGHIÊN CỨU GEN NGƯỜI - HUMAN GENETICS

Osteoporosis REAL-TIME PCR Genotyping Kit

NGHIÊN CỨU GEN NGƯỜI - HUMAN GENETICS

STT

Tên bộ kits

Mô tả tổng quát

Chứng chỉ

7

Osteoporosis REAL-TIME PCR Genotyping Kit

 

(chẩn đoán loãng xương)

Phương pháp phát hiện: Rt

Mẫu xét nghiệm: máu ngoại vi toàn phần

Phương pháp tách chiết DNA: PREP-RAPID-GENETICS, PREP-GS-GENETICS

Định dạng bộ kit: non-pipetted (tube nên được mua thêm)

Nhiệt độ bảo quản: +2 .. + 8 ºС; Taq-polymerase: - 20 ºС

Thời hạn sử dụng: 6 tháng

RUO

 

Loãng xương là một bệnh hệ thống xương tiến bộ đặc trưng bởi sự suy giảm mật độ và kiến trúc vi mô bị suy yếu của mô xương. Nó đi kèm với giảm sức mạnh của xương và nguy cơ gãy xương cao. Bệnh loãng xương là nguyên nhân hàng đầu gây ra tình trạng khuyết tật ở người cao tuổi, và là yếu tố góp phần làm gãy xương đùi, do tỷ lệ tử vong cao. Theo WHO, khoảng 35% gãy xương ở phụ nữ và 20% gãy xương ở nam giới bị loãng xương có liên quan đến chứng loãng xương.

Xác định các nhóm nguy cơ, chẩn đoán sớm về mật độ khoáng xương bị giảm (BMD) và phòng ngừa loãng xương đều giúp giảm nguy cơ gãy xương và khuyết tật. Tuy nhiên, ở hầu hết các quốc gia, chẩn đoán loãng xương thường xuất hiện sau khi gãy xương đã xảy ra.

Trong số tất cả các trường hợp loãng xương, loãng xương chính (chủ yếu là loãng xương sau mãn kinh) chiếm khoảng 85%. Thiếu hormone kích thích tình dục được quan sát thấy ở hậu mãn kinh, đặc biệt là estrogen, là một yếu tố nguy cơ đáng kể. Ngoài giới tính và tuổi của phụ nữ, còn có các yếu tố nguy cơ khác đối với chứng loãng xương: chủng tộc Mông Cổ hoặc da trắng, trọng lượng thấp, chiều cao cao (trên 172 cm đối với nữ và 183 đối với nam), cơ thể suy nhược. Thiếu hụt 25-hydroxy vitamin D3 là một yếu tố nguy cơ quan trọng đối với chứng loãng xương.

Lịch sử gia đình bất lợi (sự hiện diện của người thân trong gia đình bị loãng xương) thường chỉ ra nguy cơ loãng xương - các dấu hiệu gãy xương dễ vỡ, đặc biệt là gãy xương hông và xương sống. Tầm quan trọng cao của thành phần di truyền trong tác nhân gây bệnh được thể hiện: trong 45-70% trường hợp. Đặc điểm mật độ khoáng xương được truyền từ cha mẹ sang con [25, 118].

Trong một số trường hợp, mặc dù có sự hiện diện của mật độ khoáng xương bình thường khi đo, có thể có các rối loạn trong vi kiến trúc của xương dẫn đến tăng tính mong manh dễ vỡ. Tình trạng này có thể dẫn đến một đánh giá thấp nguy cơ loãng xương và gãy xương nguy hiểm. Về vấn đề này, ngày càng nhiều sự chú ý được trả cho phát hiện đa hình gen (SNP), liên quan đến loãng xương.

Mạng gen của bệnh loãng xương

Một trong những gen được biết đến nhiều nhất liên quan đến loãng xương là gen thụ thể vitamin D (gen VDR). Thụ thể Vitamin D  là một thụ thể nội tiết tố nội tiết tố cho vitamin D3. Thụ thể này có khả năng làm thay đổi sự biểu hiện của các gen liên quan đến quá trình cân bằng nội môi canxi, điều này có thể làm giảm mật độ khoáng xương ở cả trẻ em và trẻ em gái và ở phụ nữ sau mãn kinh. Ngoài ra còn có một kết nối mật độ khoáng xương thấp ở nam giới [45, 83, 102, 149].

Estrogen và các thụ thể estrogen, trong đó quan trọng nhất là thụ thể estrogen alpha (ESR1), đóng một vai trò quan trọng trong quá trình chuyển hóa mô xương. Các thụ thể estrogen được hiện diện trên cả tế bào hủy xương và trên tế bào thần kinh. Estrogens ức chế tái hấp thu xương bằng cách giảm số lượng, hoạt động và tuổi thọ của các tế bào hủy xương. Sự thiếu hụt gen đa hình của estrogen hoặc thụ thể estrogen dẫn đến rối loạn trong tái cấu trúc với ưu thế của xương hủy trên xương hình thành (Hình 42).

Hình 42. Ảnh hưởng của estrogen và sự thiếu hụt của nó đối với tế bào xương [111]

Enzyme aromatase (CYP19A1) đóng một vai trò quan trọng trong tổng hợp estrogen và loãng xương. Nó kích thích chuyển đổi testosterone thành estrogen. Nó đã được chỉ ra rằng mức độ aromatase ảnh hưởng đến tình trạng của xương xốp (cột sống), trong khi sự khác biệt về số lượng thụ thể estrogen ảnh hưởng đến tình trạng của xương chủ yếu là xương đùi (cổ xương đùi) [94].

Sự mất cân bằng của hệ thống RANK / RANKL /OPG là một yếu tố mạnh mẽ dẫn đến sự phát triển của bệnh loãng xương sau mãn kinh do thiếu hụt estrogen. Mức độ phục hồi của xương được kiểm soát bởi sự cân bằng giữa sự xuất hiện của osteoprotegerin (OPG) và biểu hiện của bộ kích hoạt thụ thể của nhân tố hạt nhân kappa-B ligand (RANKL). Khi sự cân bằng chuyển sang OPG, sự tái hấp thu xương bị ức chế và sự hình thành xương chiếm ưu thế. Trong trường hợp ảnh hưởng phổ biến của RANKL, và sự phục hồi xương chiếm ưu thế [76, 108, 141].

Việc sản xuất các cytokine proresorptive thúc đẩy quá trình tạo xương và ức chế quá trình hủy xương apoptosis. iệc sản xuất các cytokine proresorptive thúc đẩy quá trình tạo xương và ức chế quá trình apoptosis của osteoclast. Một trong những cytokine quan trọng nhất (các sản phẩm protein của các tế bào hệ thống miễn dịch), ảnh hưởng đến chuyển hóa xương là interleu- kin-6 (IL-6) giữa sự tồn tại của các đa hình bảo vệ, trong đó nguy cơ tái hấp thu xương và loãng xương ở phụ nữ sau mãn kinh. 43].

Giai đoạn chuyển hóa mô xương, độc lập với estrogen được kích hoạt với sự tham gia của LRP5 (protein 5 liên quan đến lipoprotein mật độ thấp), kích thích sự tăng sinh và sự khác biệt của các tế bào xương và tế bào hủy xương. Khuyết điểm của gen này là một yếu tố nguy cơ độc lập đối với gãy xương, và không phụ thuộc vào tính chất xương, tuổi tác và giới tính [108].

Rối loạn trong cấu trúc collagen là một trong những nguyên nhân của gãy xương trong loãng xương sau mãn kinh mà cũng không liên quan đến mật độ khoáng xương. Nhờ collagen, mô xương kết hợp độ cứng và độ bền với độ đàn hồi và tính linh hoạt, trong khi đa hình trong vùng điều tiết của gen COL1A1 (collagen, loại I, alpha 1) mã hóa chuỗi α-1, dẫn đến rối loạn trong cấu trúc collagen của xương và làm tăng nguy cơ loãng xương [50, 148].

Điều quan trọng là phải nhớ rằng cùng một tham số có thể có các hiệu ứng khác nhau ở nam giới và phụ nữ. Ngoài ra còn có sự phụ thuộc dân số trong cả biểu hiện di truyền và kiểu hình (xem Bảng 69) [107, 132, 137, 77]. Ví dụ, locus đa hình -1997G / T của gen COL1A1 được kết hợp với BMD ở hầu hết các quần thể trên thế giới.

Ví dụ, theo một cuộc khảo sát giữa châu Âu, -1997 những cá nhân mang alen G thì có BMD cao hơn, trong khi đối với phụ nữ từ Anh và Nhật Bản,  -1997, mang alen G thì ngược lại, liên quan với BMD thấp [82, 127, 146] .

Bảng 69. Tần số của các biến thể allelic của một số dấu hiệu di truyền cho loãng xương ở quần thể châu Âu và châu Á [77]

 

Genes (loci)

 

Biến thể

Dân số

Châu Âu

Châu Á

 

VDR 3’-end

BSM I

BB- 12-32 %, Bb -38-72 %, bb – 16-44 %

BB- 0-6.4%, Bb – 10-22%, bb -76.5-90 %

Taq I

TT- 32-41 %, Tt-41-56 %, tt-6-22 %

TT- 75.2-90 %, Tt-10-23 %, tt- 0-1.5 %

Apa I

AA-26-36 %, Aa - 43-54 %, aa 13.7-28 %

AA-3-13.6 %, АA – 28-50 %, aa -39-69 %

VDR start codon

For I

FF – 36 %, Ff –49 %, ff –15 %

FF – 33 %, Ff –53 %, ff –14 %

 

ESR

 

PTH ( hormone cận giáp)

Pvu II (T397C)

PP – 18 %, Pp – 53 %, pp – 29 %

PP – 18 %, Pp – 52 %, pp – 30 %

Xba I (C351G)

XX – 10 %, Xx – 48 %, xx – 42 %

XX – 5 %, Xx – 31 %, xx – 64 %

BSTB I

BB – 82 %, Bb – 17 %, bb – 1 %

thụ thể glucocorticoid (GR)

Asn363Ser

Asn Asn – 87.7-97.7 %, Asn Ser – 2.3-9.7 %, Ser Ser- 0-2.6 %

Asn Asn – 100 %

Thụ thể Calcitonin

С447-T

RR – 49 %, Rr – 44 %, rr – 7 %

(CTR)

Taq I

TT – 11 %, Tt – 50 %, tt – 39 %

COLIA1

1a1-Sp1

SS – 48.8-70.7 %, Ss – 26.1-37.5 %, ss – 0-13.7 %

SS – 100 %

IL6

174 G/C

GG – 25.4-55.9 %, GC -35.1-52.8 %,

GG – 74-100 %, GC – 0.7-24.3 %,

 

CC – 7.9-25.4 %

CC – 0-2 %

         
 

 

Nghiên cứu di truyền trong dân số Nga cũng xác định sự khác biệt về tầm quan trọng của một số đa hình, tùy thuộc vào các đặc điểm của vùng và dân tộc.

Theo Maltsev AV, trong tổng số mẫu phụ nữ sau mãn kinh từ vùng Volga-Ural của Nga, những người làm tăng nguy cơ gãy xương do loãng xương hóa ra là kiểu gen đa hình rs3102734 và kiểu gen * T * T của biến thể đa hình rs3134069 của Gen OPG, kiểu gen * C * T của biến thể đa hình rs1801197 của gen CTR [13].

Đồng thời, ở phụ nữ gốc Nga, dấu hiệu tăng nguy cơ gãy xương là * C * T kiểu gen của biến thể đa hình rs1801197 của gen CTR và kiểu gen * C * C của biến thể đa hình rs9630182 của gen PTH. Trong khi phụ nữ dân tộc Tatar có nguy cơ gãy xương có liên quan đến kiểu gen T * T của tính đa hình rs3102734 của gen OPG, * T * T kiểu gen của tính đa hình rs3134069 của gen OPG, haplotype * TG cho loci rs3102735 và kiểu gen Δ3 / 12 của đa hình (TAAA) n lặp lại của gen CYP19, kiểu gen * T * T của biến thể đa hình rs3020314 của gen ESR1 [13, 19].

Các dấu hiệu giảm nguy cơ gãy xương là kiểu gen C * T * của đa hình rs3102734 của gen OPG và kiểu gen dị hợp tử * T * G của biến thể đa hình rs3134069 của gen OPG trong tổng mẫu. Hơn nữa, trong số những người Tatar, đánh dấu nguy cơ thấp cũng là: * CGTG haplotype cho loci rs3102734, rs2073617, rs2073618 và rs3134069, và * GG haplotype cho loci rs3102734, rs2073617 của gen OPG, trong khi đối với phụ nữ dân tộc Nga - kiểu gen C * T * của locus rs9630182 gen PTH [13].

Ngoài các yếu tố nguy cơ di truyền, các yếu tố phi di truyền (môi trường) đóng một vai trò quan trọng trong sự hình thành của bệnh [89]:

  • Các yếu tố không thay đổi:
  • Mật độ khoáng xương thấp;
  • Phụ nữ;
  • Trên 65 tuổi;
  • Dân tộc da trắng;
  • Tiền sử gia đình (loãng xương hoặc gãy xương dễ vỡ ở tuổi trên 50 năm);
  • Giảm chức năng sinh dục;
  • Khả năng hấp thu glucocorticoid trong hơn 3 tháng;
  • Lịch sử gãy xương;
  • Sự cố định kéo dài
  • Các yếu tố có thể thay đổi
  • Chỉ số khối cơ thể BMI <18.5 kg/m2, hay cân nặng <57 kg;
  • Hút thuốc;
  • Hoạt động thể chất;
  • Không đủ canxi;
  • Thiếu vitamin D (cũng do thiếu ánh nắng mặt trời);
  • Lạm dụng rượu

Sự tồn tại của yếu tố nguy cơ di truyền là cơ sở để phân tích di truyền. Đánh giá toàn diện các yếu tố di truyền và không di truyền cho phép đánh giá nguy cơ và tiên lượng bệnh càng chính xác càng tốt và chọn các biện pháp phòng ngừa và / hoặc điều trị riêng lẻ.

Chỉ định phân tích di truyền:

  • Loãng xương, giòn xương và gãy xương bệnh lý ở người thân
  • Rối loạn nội tiết dẫn đến rối loạn kinh nguyệt, các bệnh về hệ tiêu hóa, hệ thống tuần hoàn và các bệnh khác
  • Thuốc (glucocorticoids)
  • Nếu có yếu tố nguy cơ không di truyền đối với bệnh loãng xương: sau mãn kinh, trọng lượng thấp, thiếu tập thể dục, cơ thể yếu, thiếu vitamin D3 25-hydroxy, bao gồm tiêu hóa, tăng tiêu thụ cà phê, thói quen xấu (rượu, thuốc lá)
  • Không dung nạp cá nhân với lactose (các sản phẩm sữa)

DNA-Technology đã phát triển một bộ kit (xem Bảng 70 và 71) để xác định các đa hình di truyền liên quan đến loãng xương bằng phương pháp real-time PCR .

Bảng 70. Đa hình di truyền liên quan đến loãng xương

Gene

Chức năng của gen

Đa hình

Mã định danh *

Possible genotypes

Biểu hiện lâm sàng

VDR – vitamin D3 receptor

Các thụ thể có khả năng làm thay đổi sự biểu hiện của các gen liên quan đến sự cân bằng nội môi canxi và đáp ứng miễn dịch.

283 A>G

[Bsml]

rs 1544410

A/A

Không có bất thường

A/G

Giảm mật độ khoáng xương, bất kể giới tính

G/G

2A>G (Lys2Arg)

[FokI]

rs 2228570

A/A

Không có bất thường

A/G

Giảm mật độ khoáng xương ở trẻ em và phụ nữ sau mãn kinh

G/G

ESR1 –

estrogen receptor

alpha

Yếu tố phiên mã được kích hoạt bằng ligand qua đó tác động của estrogen được thực hiện.

-397T>C [PvuII]

rs2234693

T/T

Phụ thuộc vào sắc tộc

T/C

C/C

-351 G>A [XbaI]

rs 9340799

G/G

Không có bất thường

G/A

Giảm mật độ khoáng xương bắt đầu từ tuổi dậy thì muộn ở bé gái.

Giảm khoáng hóa xương mặt ở phụ nữ sau mãn kinh

A/A

Giảm nguy cơ loãng xương tổng thể, đặc biệt là sự dễ gãy của xương sống.

RANKL – receptor

activator of

nuclear factor

kappa-B ligand

Khi gắn kết RANK và RANK-ligand, việc huy động sự gia tăng và kích hoạt tế bào xương xảy ra

C>T

rs9594738

C/C

Không có bất thường

C/T

Nguy cơ rối loạn tu sửa xương.

T/T

C>T

rs9594759

C/C

Không có bất thường

C/T

Nguy cơ rối loạn tu sửa xương.

T/T

TNFRSF11B

osteoprotegerin,

steoclastogenesis

inhibitory factor

Ức chế sự ràng buộc của RANK và RANK-ligand, do đó ức chế việc huy động, tăng sinh và kích hoạt tế bào hủy xương

245 A>C

rs3134069

A/A

Không có bất thường

A/C

Tăng khả năng dễ gẫy xương.

Giảm mật độ xương ở vùng thắt lưng ở phụ nữ sau mãn kinh

C/C

163 (160) Т>С

rs 3102735

T/T

Không có bất thường

T/C

Tăng khả năng dễ gẫy xương.

Giảm mật độ xương ở vùng thắt lưng ở phụ nữ sau mãn kinh

C/C

4381 A>G

rs4355801

A/A

Không có bất thường

A/G

Giảm mật độ xương và nguy cơ loãng xương.

G/G

LRP5 – lowdensity lipoprotein

receptor-related

protein 5

Làmột phầncủa con đường tín hiệu Wnt kích thích sự tăng sinh và sự khác biệt của các tế bào xương và tế bào hủy xương

3989 C>T

(Ala1330Val)

rs3736228

C/C

Không có bất thường

C/T

Loãng xương và gãy xương

T/T

1999 G>A

(Val667Met)

rs4988321

G/G

Không có bất thường

G/A

Loãng xương và gãy xương

A/A

COL1A1 –

collagen, type I,

alpha 1

Collagen là cơ sở protein liên kết mô,bao gồm mô xương.

-1997 С>А

rs1107946

C/C

Không có bất thường

C/A

Giảm mật độ khoáng xương.

Liên quan đến loãng xương.

A/A

1546 (6252) G>T

[Sp1 S>s]

rs 1800012

G/G

Không có bất thường

G/T

Giảm mật độ khoáng xương.

Liên quan đến loãng xương.

T/T

IL6 –

interleukin-6 (IL-6)

IL-6 là một cytokine đa chức năng có liên quan đặc biệt đến sự chuyển hóa xương.

-174 G>C

rs 1800795

G/G

Không có bất thường

G/C

Rủi ro xương khớp

C/C

Giảm nguy cơ tái hấp thu xương và loãng xương ở phụ nữ sau mãn kinh

CYP19A1 –

aromatase

Một loại enzyme chuyển đổi androgen thành estrogen

C>T

 

rs936306

C/C

Không có bất thường

C/T

Rủi ro xương khớp

T/T

A>G

rs2414096

A/A

Không có bất thường

A/G

Rủi ro xương khớp

G/G

* Ghi nhãn trong cơ sở dữ liệu dbSNP của Trung tâm quốc gia về thông tin công nghệ sinh học, NCBI                                                                                                 

 

Bảng  71. Osteoporosis Real-Time PCR Genotyping Kit

Số lượng kiểm tra

48 tests

Định dạng thuốc thử

Not pre-aliquoted

Taq-AT polymerase

1 tube (192 mcl)

Dầu khoáng

Related News

Hotline 096 71 73 756

info@medivision.com.vn

307/28/9 Đường Nguyễn Văn Khối, Phường 8, Quận Gò Vấp, Thành phố Hồ Chí Minh

Copyrights © 2018 Công ty TNHH Thương Mại Dịch Vụ MEDIVISION. Design by Nina Co.